Часто задаваемые вопросы

Если кровь, взятую из вены в пробирку, оставить саму по себе, то содержащиеся в ней форменные элементы из-за фактора свертывания отделяются и оседают, и образуется сгусток; жидкая часть над сгустком является сывороткой. Свертывание крови можно предотвратить с помощью некоторых веществ, называемых антикоагулянтами. Если кровь, свертывание которой предотвращено антикоагулянтом, оставить в пробирке саму по себе, то форменные элементы отделяются и оседают на дно, верхняя жидкая часть – это плазма. Плазма крови – это жидкая часть крови, которая движется по кровеносным сосудам. Отличие сыворотки от плазмы в том, что она не содержит некоторых факторов свертывания, особенно фибриногена. Билирубин и каротины придают сыворотке желтый цвет.

Рекомендуемая последовательность пробирок для взятия крови:

1. Культура крови; 2. Коагуляция; 3. Сыворотка, с гелем/без геля; 4. Гепарин, с гелем/без геля; 5. EDTA; 6. Глюкоза; 7. Другие.

Для тщательного перемешивания добавки и крови сразу после забора крови осторожно переверните пробирки и верните их в вертикальное положение. Это двойное движение представляет собой полный цикл. Обратите внимание на рекомендованное количество циклов в зависимости от используемых пробирок.

Не встряхивайте пробирки. Сильное перемешивание может вызвать пенообразование или гемолиз. Недостаточное или несвоевременное перемешивание пробирок для сыворотки может вызвать задержку свертывания крови. Недостаточное перемешивание пробирок, содержащих антикоагулянты, приведет к накоплению тромбоцитов, коагуляции и/или неправильным результатам теста.

Ниже кратко приведены области использования вакуумных пробирок для забора крови в зависимости от их цвета.

Пробирки с EDTA (ФИОЛЕТОВЫЕ) предназначены для исследования гемограммы, ретикулоцитов, формулы лейкоцитов, группы крови, теста Cross-match, прямого теста Кумбса, косвенного теста Кумбса.

Пробирки с цитратом натрия  (СИНИЕ) предназначены для исследования PT, aPTT, фибриногена, D-димера, факторов свертывания крови (FII, FV, FVII, FVIII, FIX, FX, FXI, FXII, FXIII), коллагена-ADP, коллаген-эпинефрина, протеина C, протеина S, ATIII, TT, волчаночного антикоагулянта, VWF:Ag и VWF:RiCoF, антифактора Xa.

Пробирки с черными крышками (с цитратом натрия) предназначены для исследования седиментации.

Пробирки для сыворотки (желтые и красные) используется для многих исследований, таких как биохимический, на гормоны,  микробиологический, серологический, иммунологический, и банка крови.

Пробирки с гепарином (зеленые) предназначены для биохимического анализа, других анализов, требующих NT-ProBNP и плазму. Гепарин натрия используется для определения уровня лития. Гепарин натрия или лития используется для определения уровня аммиака.

Пробирки (серые) для исследования глюкозы используются для измерения уровня глюкозы и для длительного хранения некоторых веществ, таких как этанол. Антигликолитические средства удерживают глюкозу до 5 дней. Антигликолитические агенты удерживают глюкозу до 5 дней.

Центрифугирование – это метод разделения. Используя центробежную силу, полученную при вращательном движении, частицы в образце разделяются в соответствии с их формой, размером и плотностью.

Центрифугирование – один из важных этапов фазы предварительного анализа, поэтому для обеспечения правильного центрифугирования кровь следует правильно забрать, поместить в центрифугу в течение определенного времени и отделить сыворотку.

Для получения плазмы образцы с EDTA, гепарином, фторидом или цитратом можно центрифугировать без ожидания. Для получения сыворотки пробирки с желтыми крышками и гелем следует хранить при комнатной температуре и обязательно в вертикальном положении до завершения свертывания. Этот период составляет не менее 30 минут и не более 1 часа.

ВНИМАНИЕ! Фибрин, образующийся в пробирках для сыворотки, хранящихся горизонтально, может прилипать к крышке или боковым стенкам пробирки и несмотря на центрифугирование может не отделиться от сыворотки.

Пробирки с одинаковым уровнем крови следует сбалансированно поместить в чаши центрифуги, при необходимости следует использовать балансировочную пробирку. Крышки пробирок должны быть всегда закрыты. В пробирках с открытой крышкой из-за потери углекислого газа увеличивается pH. Повышение pH приводит к получению ошибочных результатов в некоторых тестах, а закрытие крышки пробирки во время центрифугирования также предотвращает изменение концентрации аналита из-за испарения.

Во время работы центрифуги следует находиться рядом. При непредвиденном звуке, вибрации, запахе дыма или дыме центрифугу необходимо остановить при помощи кнопки остановки (stop). Не рекомендуется выключать центрифугу, вынув сетевой кабель из розетки или отключив от сети, так как это приведет к отключению тормозной системы.

Центрифуги, используемые в лаборатории, обычно уведомляют пользователя звуком о завершении запрограммированного периода центрифугирования. Нельзя открывать или пытаться открывать крышку без остановки центрифуги и уведомления об открытии крышки.

Действия, выполняемые после центрифугирования, влияют на устойчивость измеряемых параметров. Как правило, рекомендуется как можно быстрее отделить сыворотку или плазму, полученные после центрифугирования, от ее клеточных элементов. Пробирки с гелевыми разделителями, используемые в настоящее время, обеспечивают удобство за счет отделения сыворотки/плазмы от клеток.

Рекомендуется исследование отделенных образцов сыворотки/плазмы, которые хранятся при комнатной температуре после центрифугирования, в течение 8 часов; если исследование не может быть выполнено в течение 8 часов, то образцы следует хранить в холодильнике (2-8 °C).

Учитывая свойства гелевого барьера, используемого производителями пробирок, рекомендуется центрифугировать пробирки с определенной силой-g. Если не принимать во внимание рекомендуемую скорость и время, это может привести к тому, что гелевый барьер не сможет полностью выполнить свои функции. Рекомендуемое значение центрифуги и время для наших пробирок составляет 1800–2000 RCF (г) и минимум 10 минут. Кроме того, для обеспечения полного процесса разделения гелем рекомендуется использовать центрифугу с подвижным ротором вместо фиксированного (углового) ротора.

Поскольку центрифуги, используемые в лабораториях, могут быть разного диаметра, важно ввести значение RCF. Если к устройству невозможно применить ввод значения RCF, то обязательно необходимо ввести значение RPM. Даже если введенное здесь значение RPM будет такое же, полученные значения RCF будут более или менее соответствовать длине диаметра центрифуги. Для этого перед использованием пробирок персоналом лаборатории рекомендуется выполнить проверку. Для работы с рекомендованными значениями RCF в соответствии с радиусом ротора используемой центрифуги можно использовать следующую формулу:

RPM=1000*√(RCF11.18*rcm) 

r: радиус ротора центрифуги

RCF: относительное центробежное ускорение

RPM: количество оборотов в минуту

В зависимости от состояния взятой пробы иногда при недостаточном движении геля (особенно из-за значения гематокрита выше 50%) рекомендуется использовать более высокую силу-g и более длительное время центрифугирования.

Центрифугирование следует проводить в охлаждаемой центрифуге. Более высокие температуры могут отрицательно повлиять на физические свойства геля. 20 °C-22 °C идеально подходит для эффективности сыворотки или плазмы.

Пробирки с разделительным гелем необходимо центрифугировать не позднее, чем в течение 2 часов. Продолжительный контакт клеток крови с сывороткой и плазмой приводит к ложным результатам. После формирования барьера повторное центрифугирование не рекомендуется. Повторное центрифугирование пробирок может привести к возможному снижению гелевых барьеров, что приведет к разделению частиц геля и появлению их в сыворотке или плазме.

Перед отправкой пробирок с гелем почтой или пневматической системой для минимизации повреждения гелевых барьеров при внезапном встряхивании пробирки после центрифугирования при комнатной температуре необходимо выдержать в вертикальном положении примерно в течение часа.

Внешнее давление среды также различается в зависимости от значений высоты места, где будут использоваться пробирки. Это приведет к тому, что стандартная вакуумная пробирка будет иметь меньший объем забора проб на больших высотах из-за меньшего внешнего давления, а на малых высотах – больший объем забора проб из-за высокого внешнего давления.

По этой причине при заказе по возможности производитель должен быть проинформирован о значениях высоты с учетом регионов, где будут использоваться пробирки. Таким образом, пробирки вакуумируются с правильными значениями вакуума в соответствии с местом, где будут использоваться пробирки, и будут предотвращены неправильный забор проб и ошибочные результаты теста.

Не рекомендуется переносить образец из шприца в пробирку. Нажатие на поршень шприца во время переноса может вызвать повреждение клеток крови, поскольку это приведет к перемещению образца за счет создания положительного давления, и это вызывает такие состояния, как гемолиз. Давление внутри пробирки приведет к открытию крышки и разбрызгиванию пробы.

Кроме того, использование шприца для забора крови может привести к недостаточному наполнению или переполнению пробирок, что приведет к неправильному соотношению кровь/добавка и потенциально неверным результатам анализа.

Для тщательного перемешивания добавки и крови сразу после забора крови осторожно переверните пробирки и верните их в вертикальное положение. Это двойное движение представляет собой полный цикл. Обратите внимание на рекомендованное количество циклов в зависимости от используемых пробирок.

Не встряхивайте пробирки. Сильное перемешивание может вызвать пенообразование или гемолиз. Недостаточное или несвоевременное перемешивание пробирок для сыворотки может вызвать задержку свертывания крови. Недостаточное перемешивание пробирок, содержащих антикоагулянты, приведет к накоплению тромбоцитов, коагуляции и/или неправильным результатам теста.

После перемешивания пробирки обязательно необходимо держать в вертикальном положении. Фибрин, образующийся в пробирках для сыворотки, хранящихся горизонтально, может прилипать к крышке или боковым стенкам пробирки и несмотря на центрифугирование может не отделиться от сыворотки.

Центрифугирование следует проводить в охлаждаемой центрифуге. Более высокие температуры могут отрицательно повлиять на физические свойства геля. 20 °C-22 °C идеально подходит для эффективности сыворотки или плазмы.

Пробирки с разделительным гелем необходимо центрифугировать не позднее, чем в течение 2 часов. Продолжительный контакт клеток крови с сывороткой и плазмой приводит к ложным результатам. После формирования барьера повторное центрифугирование не рекомендуется. Повторное центрифугирование пробирок может привести к возможному снижению гелевых барьеров, что приведет к разделению частиц геля и появлению их в сыворотке или плазме.

Перед отправкой пробирок с гелем почтой или пневматической системой для минимизации повреждения гелевых барьеров при внезапном встряхивании пробирки после центрифугирования при комнатной температуре необходимо выдержать в вертикальном положении примерно в течение часа.

Гемолиз: это расщепление эритроцитов в крови и смешивание гемоглобина и другого содержимого с кровью. Гемолиз влияет на результаты и вызывает ошибочные результаты в некоторых тестах из-за смешивания эритроцитарных веществ с сывороткой, гемодилюции и в некоторых тестах – по причине химической интерференции. В этом случае сыворотка не такая, какой должна быть, имеет красный цвет, который темнеет в зависимости от степени гемолиза.

Ниже приведены некоторые из тестов, наиболее подверженных влиянию гемолиза:

Связывающая способность железа, лактатдегидрогеназа, калий, мочевина, фосфор, аланинаминотрансфераза, билирубин, хлорид, натрий, железо, аспартатаминотрансфераза, кальций, креатинкиназа, амилаза.

Липемия: наличие липидов выше нормы в сыворотке или плазме. Липемию можно наблюдать в образцах, взятых не натощак, или в сыворотке или плазме пациентов с гиперлипидемией. Мутность, плотность и изменение цвета липемической сыворотки могут привести к ошибочным результатам теста.

Иктеричность: повышение уровня билирубина в сыворотке или плазме.

Некоторые из тестов, на которые больше всего влияет иктеричность:

Общий холестерин, альбумин, мочевая кислота, холестерин ЛПВП, ферритин.

Помимо этих параметров, ошибочные результаты могут быть получены и в других тестах из-за помутнения сыворотки.

Такие обстоятельства, как ежедневный биологический ритм, упражнения, голод, диета, прием лекарств, употребление алкоголя или курение, могут повлиять на многие лабораторные тесты. Липемические образцы могут вызывать засорение зондов анализаторов и влиять на некоторые параметры теста. Особенно для исследования глюкозы, липидов крови, фосфора, железа, ферритина, ЩФ, фолиевой кислоты и витамина B12 между последним приемом пищи и взятием крови должно пройти не менее 10-12 часов, но не более 16 часов. В случае необходимости разрешается пить воду.

За 24 часа до исследования рекомендуется воздержаться от тяжелых и сложных упражнений, а перед забором крови пациенту следует отдохнуть в течение получаса. У курильщиков повышаются карбоксигемоглобин, катехоламины плазмы и кортизол сыворотки. Изменения в этих гормонах увеличивают количество белых кровяных телец, таких как нейтрофилы и моноциты, и уменьшают количество эозинофильных клеток. В результате хронического курения может увеличиваться концентрация гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов. При регулярном принятии лекарства из-за имеющегося заболевания не следует прекращать его прием, за исключением контроля и рекомендации врача.

Полученные результаты тестирования различаются в зависимости от таких факторов, как пищевые привычки, рацион питания, качество питания, привычки занятия спортом и форма упражнений, генетическая структура, география места проживания различных обществ.

Можно сгруппировать переменные, которые влияют на результаты теста, на две основные группы – это контролируемые переменные, такие как положение человека, постельный режим, упражнения, курение, употребление алкоголя, и неконтролируемые переменные, такие как возраст и пол.

A- Управляемые переменные;

1. Положение

При переходе из лежачего в вертикальное положение у взрослого человека объем крови уменьшается примерно на 10% (600-700 мл). Эта ситуация может вызвать повышение концентрации белка в плазме примерно на 8-10%. Также это уменьшение объема плазмы может вызвать повышение уровня ферментов, белковых гормонов и препаратов, связанных с белками. Изменение положения также может вызвать изменение уровня альдостерона, катехоламина и антидиуретического гормона.

2. Длительный постельный режим

Во время длительного постельного режима снижаются уровни белка сыворотки и альбумина, снижаются уровни связанных с белками веществ, за исключением кальция сыворотки, а уровни кальция в крови и моче повышаются в результате мобилизации кальция в костях.

3. Упражнения

Упражнения средней интенсивности повышают уровень глюкозы в крови и стимулируют высвобождение инсулина. После упражнений низкой интенсивности повышается уровень лактата в крови. Это может вызвать изменение pH среды и повлиять на результаты теста. Даже при очень коротких прогулках можно наблюдать повышение уровня ферментов, таких как CK, AST, LDH. В то же время уровень некоторых гормонов (Т4, тестостерона, ЛГ и др.) может повышаться после тренировки.

Активность ферментов скелетных мышц в сыворотке крови спортсменов в состоянии покоя может быть выше, чем у обычных людей. Уровни мочевины, мочевой кислоты, креатинина и тироксина в сыворотке крови у спортсменов могут быть выше.

Несмотря на то, что физические упражнения вызывают снижение уровня холестерина в сыворотке до 25%, они вызывают повышение уровня ЛПВП.

4. Циркадные изменения

Большинство компонентов жидкостей организма демонстрируют циклические или циркадные изменения в течение дня. Факторами, способствующими этим изменениям, являются положение, активность, питание, стресс, дневной свет/темнота, сон/бодрствование. Поскольку по некоторым параметрам это изменение велико, следует обращать внимание на время забора пробы. Например, к полудню уровень железа в сыворотке может упасть на 50%. Пик уровня кортизола в сыворотке крови наблюдается в утренние часы и снижается после обеда. В то время как высвобождение гормона роста является максимальным во время сна, оно уменьшается при бодрствовании.

5. Путешествие

Поездки на несколько часов могут изменить циркадный ритм. Во время полета, когда уровни глюкозы и триглицеридов в сыворотке повышаются, секреция глюкокортикоидов стимулируется. Во время длительных перелетов жидкость и натрий задерживаются.

6. Питание

В случае забора крови на сытый желудок наиболее подвержены влиянию (в сторону увеличения) параметры глюкозы, железа, общих липидов и щелочной фосфатазы. После вечернего приема пищи с высоким содержанием белка может наблюдаться, повышение уровня азота мочевины, фосфата и мочевой кислоты в сыворотке даже через 12 часов после приема пищи.

Не только питание, но и вещества в составе пищи могут повлиять на результаты тестов. Кофеин может нарушить толерантность к глюкозе, что приведет к ее повышению. Две чашки кофе могут увеличить концентрацию свободных жирных кислот в плазме на 30%. При длительном потреблении кофеина несмотря на небольшое понижение уровня общего холестерина, уровень триглицеридов может увеличиваться. Авокадо, оказывая влияние на секрецию инсулина, снижает толерантность к глюкозе, лук же снижает уровень глюкозы в плазме и реакцию инсулина на глюкозу.

Недостаточное питание может вызвать снижение уровня ферментов, а также уровня общего белка и альбумина в сыворотке. Возможно понижение уровня гормонов щитовидной железы в сыворотке.

7. Ожирение

Существует положительная корреляция между уровнем холестерина в сыворотке крови и ожирением. Уровни мочевой кислоты в сыворотке у лиц с массой тела более 80 кг повышаются по отношению к массе тела. По мере увеличения массы тела уровни LDH в сыворотке повышаются у обоих полов. У мужчин уровни AST, креатинина, гемоглобина и общего белка в сыворотке увеличиваются с увеличением массы тела, у женщин же повышаются уровни кальция в сыворотке. У пациентов с ожирением при повышении уровня инсулина в плазме снижается ответ на глюкозу. У мужчин с ожирением снижается уровень тестостерона в сыворотке.

8. Курение

Влияние курения на результаты тестов зависит от количества сигарет и продолжительности курения. У курильщиков повышено количество эритроцитов в крови, у заядлых курильщиков количество карбоксигемоглобина может превышать 10% от общего гемоглобина. Увеличивается количество лейкоцитов в крови.

Курение влияет на иммунный ответ. У курильщиков уровни IgA, IgG и IgM в сыворотке ниже, уровни IgE выше, чем у некурящих. У курильщиков наблюдается небольшая положительность уровня РЭА.

9. Употребление алкоголя

Умеренное потребление алкоголя очень мало влияет на лабораторные исследования. Умеренное потребление легкого алкоголя вызывает повышение уровня триглицеридов, глюкозы, лактата и кортизола. Уровни GGT, AST и ALT могут быть выше у лиц, хронически употребляющих алкоголь, по сравнению со здоровым населением.

10. Использование лекарств

Многие лекарства могут повлиять на результаты лабораторных исследований. О влиянии принимаемых лекарственных препаратов на тестирование можно узнать у специалиста лаборатории. При необходимости следует проинформировать лабораторию о лекарствах, которые пациент регулярно принимает.

B- Неконтролируемые переменные

1. Возраст

Референсный диапазон многих тестов зависит от возрастной группы. Например, у детей в период роста и развития уровень белка в плазме, мышечных и костных ферментов выше, чем у взрослых. Уровни мочевины, мочевой кислоты, триглицеридов и холестерина в сыворотке крови у взрослых выше, уровни ферментов ниже, чем в подростковом возрасте. У пожилых людей снижается клиренс креатинина, увеличивается белок мочи. У мужчин старше 50 лет уровень тестостерона в сыворотке снижается, у женщин повышается уровень ФСГ и ЛГ, снижается уровень эстрогена.

2. Пол

До предпубертатного периода нет большой разницы между полами, после полового созревания у мужчин уровень ферментов, такие как ALP, ALT, AST, CK в сыворотке, выше. Уровни альбумина, кальция, магния и холестерина в сыворотке выше у мужчин. Гемоглобин и железо у женщин ниже. Уровень ЩФ высок у женщин в постменопаузе.

3. Беременность

Результаты анализов могут отличаться в зависимости от увеличения среднего объема крови. Низкий уровень глюкозы в моче может быть положительным.

4. Сезонные изменения, факторы окружающей среды

Некоторые результаты лабораторных тестов могут отличаться в летнее и зимнее время года. Например, синтез витамина D (1,25 дигидроксихолекальциферола) увеличивается в летние месяцы. Уровень гемоглобина выше у людей, живущих на возвышенностях. Характеристики географической области, в которой живет человек, могут изменять состав жидкостей организма.

5. Жар

Может влиять на многие параметры, такие как глюкоза, липиды и мочевая кислота, особенно белки с положительным и отрицательным реактивным характером острой фазы. Одновременно влияет на гормональные реакции.

6. Переливание

При введении цельной крови или плазмы возможно повышение концентрации белков в плазме.

Референсное значение – это значение, полученное в результате измерений или наблюдений, проведенных в определенном образце индивидуума или группы.

На основе статистической интерпретации этих значений создается референсный диапазон распределения. Результаты, полученные в клинических лабораториях, интерпретируются с учетом значений референсного диапазона. Таким образом определяется состояние здоровья или болезни человека.

Определение референсных диапазонов производится в соответствии с рекомендациями Государственного комитета по клиническим лабораторным стандартам (National Committee for Clinical Laboratory Standards: NCCLS) и Международной федерации клинической химии и лабораторной медицины (International Federation of Clinical Chemistry: IFCC). Таким же образом, выбор реферансных лиц также стандартизирован в документах NCCLS и IFCC. Позже NCCLS изменил свое название на Институт клинических и лабораторных стандартов (Clinical and Laboratory Standards Institute: CLSI).

Для каждого теста производитель определяет референсный диапазон. Однако невозможно сказать, насколько точно этот диапазон отражает референсные значения общества, в котором мы живем. Несомненно, референсные диапазоны будут варьироваться с учетом социально-экономических и географических различий между обществами. По этой причине каждая лаборатория в соответствии со стандартными методами должна определить референсные значения для общества в регионе, который она обслуживает, и характерные имено для этого региона. Производители наборов в листках-вкладышах своих комплектов после указания референсных значений также рекомендуют, чтобы «каждая лаборатория должна определять свой собственный референсный диапазон».

Критическое (паническое) значение – это лабораторный результат, который указывает на опасную для жизни ситуацию и может потребовать срочного вмешательства, чтобы пациент выжил. В лабораториях термины «паническое значение» или «критическое значение» используются с точки зрения здоровья пациента, наблюдения и лечения, когда наблюдается результат, который намного ниже или выше референсных значений или когда есть данные, указывающие на серьезную инфекцию.

Ниже приведен пример таблицы для общепринятых панических значений.  В ней представлены средние значения и они могут варьироваться в зависимости от возраста (малыш, ребенок, взрослый) и даже пола. Следовательно, каждая лаборатория должна определить свой собственный референсный диапазон.

Критические (панические) значения биохимического анализа:

Критические (панические) значения для гематологического анализа:

Критические (панические) значения анализа на гормоны: